Некоторые примеры практического использования ELISA

9-03-2014, 21:50
До появления ELISA было проведено сравнительно небольшое число исследований с использованием антител к фитопатогенным грибам и бактериям. До этого времени с помощью лабораторных иммунологических тестов в основном диагностировали вирусные заболевания, уделяя относительно мало внимания грибным и бактериальным фитопатогенам. В настоящее время ELISA является рутинным лабораторным методом диагностики вироидов, вирусов, фитоплазм, бактерий, грибов и оомицетов в лабораторных условиях и широко используется для обнаружения этих патогенов в растениях, почве, воздухе, а также в других биологических образцах и объектах окружающей среды.
С тех пор, когда в 1977 г. Кларк и Адамс использовали иммуноферментный анализ для детекции вирусов растений, список возбудителей болезней, для которых был применен ELISA, постоянно увеличивается. Однако вирусы по-прежнему занимают в нем лидирующее место. Это связано прежде всего с тем, что помимо методов анализа нуклеиновых кислот, только ELISA обеспечивает быструю и надежную диагностику вирусных болезней растений. Простота и высокая производительность ELISA делают его удобным для мониторинга как вирусных заболеваний растений, так и границ распространения их возбудителей. Благодаря использованию ELISA было установлено, что многие вирусы имеют более широкий круг растений-хозяев, чем предполагалось ранее. Нередко оказывалось, что симптомы неизвестной этиологии, обнаруженные на культурных растениях, вызваны вирусом, который не встречался на них прежде. ELISA позволил уточнить ареалы распространения растительных вирусов, и некоторые из них только после внедрения этого анализа были впервые обнаружены в новых географических регионах. Данный метод широко используется для мониторинга вирусов в семенах и посевном материале, например в семенном картофеле, имеющем меристемное происхождение, или в цветочных луковицах (например, только в Голландии ежегодно тестируют сотни тысяч луковиц тюльпанов, лилий и ирисов). Количество примеров применения ELISA для диагностики вирусных болезней слишком велико, чтобы приводить здесь их полный перечень и описывать подробно. Однако, чтобы проиллюстрировать общедоступность этого теста, отметим, что коммерческие реагенты и диагностические наборы разработаны для идентификации более чем сотни вирусов культурных растений. Среди них, включая изоляты и серотипы, по крайней мере 25 вирусов зерновых злаков (ячменя, кукурузы, риса, сорго, пшеницы, овса) и 3 вируса злаковых трав (костра, травы Джонсона); 7 вирусов зернобобовых и фуражных бобовых растений (фасоли, гороха, сои, вигны, красного клевера); 17 вирусов фруктовых (яблони, банана, вишни, цитрусов, сливы, папайи, персика, ананаса) и 20 вирусов ягодных (голубики, винограда, малины, клубники) культур; 51 вирус овощей, бахчевых и корнеплодов (свеклы, кассавы, цветной капусты, сельдерея, огурца, хмеля, лука-порея, латука, перца, лука, картофеля, редиса, лука-шалота, кабачка, томата, турнепса и цуккини), а также 8 вирусов табака, 2 вируса арахиса и 2 вируса сахарного тростника. Кроме того, доступны коммерческие диагностикумы для обнаружения, по меньшей мере, 29 вирусов цветочных культур и декоративных растений.
ELISA успешно используют для фитопатогенных бактерий. Идентификацию бактерий и сейчас иногда проводят с участием поликлональных антител, но поскольку бактериальные клетки обладают сложным и гетерогенным составом поверхностных антигенов, зависящим от среды, в который они развиваются или в который их культивируют, перекрестные реакции с даже с неродственными видами являются в этом случае типичными для бактериальных патогенов. По этой причине при иммунодиагностике многих видов фитопатогенных бактерий предпочтение отдают моноклональным антителам. В настоящее время ELISA с mABs применяется для детекции и внутривидовой идентификации многих вредоносных возбудителей бактериозов растений, принадлежащих к родам Acidovorax, Agrobacterium, Clavibacter, Corynebaeterium Ervinia, Peetobacterium, Pseudomonas, Ralstonia, Xanthomonas, Xylophilus. Чувствительность ELISA для бактерий, как правило, составляет 10в5-10в6 КОЕ мл-1, что достаточно для обнаружения бактериальных патогенов в пораженном растении и среди колоний, 69 выращенных in vitro. Однако наиболее надежные диагнозы удается поставить, если анализируемый образец получают из зоны активно развивающихся некрозов, где поддерживается высокий титр фитопатогена.
В современной фитопатологии ELISA является удобным и интенсивно применяемы методом детекции различных грибов и оомицетов в растениях, почве, воздухе и других биологических образцах и объектах окружающей среды. Приведенная ниже таблица, в которой представлена информация о тестировании грибов и оомицетов, безусловно, не является исчерпывающей, но тем не менее дает представление о том, с какой целью в отношении этих фитопатогенов может быть использован данный анализ (табл. 3.1). Во-первых, ELISA применяют для детекции патогенов в тканях растений с видимыми признаками поражения, чтобы диагностировать заболевание. Кроме того, ELISA дает возможность обнаруживать латентную инфекцию и выявлять фитопатогенные грибы и оомицеты на ранних стадиях развития заболевания до появления его симптомов. Так как ELISA является количественным методом, с его помощью определяют содержание биомассы патогенов в тканях зараженных растений. Это дает представление о степени колонизации тканей, что в свою очередь, позволяет изучать типы взаимоотношений патогенов с растениями, оценивать эффективность обработок фунгицидами и проводить мониторинг болезней. В ряде случаев ELISA используют для дифференциации видов грибов и оомицетов, а при достаточной специфичности антител и для обнаружения внутривидовых различий. Наконец, метод применяют при контроле качества сельскохозяйственной продукции с целью ее проверки на предмет загрязнения этими микроорганизмами.
Некоторые примеры практического использования ELISA
Некоторые примеры практического использования ELISA
Некоторые примеры практического использования ELISA
Некоторые примеры практического использования ELISA
Некоторые примеры практического использования ELISA
Некоторые примеры практического использования ELISA

Что касается фитоплазм, то для их диагностики также используют ELISA и с поли- и с моноклональными антителами. Ho поскольку весьма трудно выделить очищенные антигены этих возбудителей в достаточном для иммунизации животных количестве, антисывортки удалось получить для сравнительно небольшого числа фитоплазм. Тем не менее, для детекции некоторых из них уже выпускаются коммерческие наборы.

  • Анализ состава жирных кислот при идентификации фитопатогенных бактерий
  • Разновидности метода ПЦР
  • Методы с использованием ПЦР
  • Методы гибридизации нуклеиновых кислот
  • Другие методы иммунодиагностики фитопатогенов
  • Быстрые ELISA-тесты
  • Основные варианты ELISA, применяющиеся в фитопатологии
  • Иммуноферментный сорбционный анализ - ELISA
  • Методы диагностики, основанные на взаимодействии антител с антигенами фитоп ...
  • Современные методы диагностики фитопатогенов

  • Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

    Министерство сельского хозяйства Оренбургской области

    Правительство Оренбургской области

    Визитка компании - сайт компании

    Ильинка Фаворит Агромир Техноорь

    Системы точного земледелия Автопартнер





    Акцент

     

    • Рейтинг@Mail.ru
    • Яндекс.Метрика
    • Индекс цитирования