Быстрые ELISA-тесты

9-03-2014, 21:52
В современной диагностике болезней растений весьма часто применяют разработанные на основе ELISA экспресс-тесты, позволяющие получать результаты в течение очень короткого времени —- через несколько десятков минут или даже за несколько минут. Помимо быстроты, достоинствами таких ELISA-тестов является возможность их проведения в полевых условиях и возможность визуального учета результатов. Они просты в использовании, не требуют сложных специальных приборов и могут быть выполнены без привлечения высококвалифицированных специалистов. Сегодня так называемый быстрый ELISA (fast ELISA) является надежным методом детекции фитопатогенов в растительном соке и почвенных экстрактах.
Одной из распространенных версий ELISA, пригодной для быстрой диагностики, является дот-ELISA (dot-ELISA или DBIA — Dot-Blot Immunoassay). Анализируемые образцы (например, экстракты гомогенизированной растительной ткани) наносят на размеченную на секции мембрану из нитроцеллюлозы или поливинилиденфторида (ПВДФ), по несколько микролитров в каждую. Сайты неспецифического связывания блокируют, покрывая мембрану чужеродным белком (например, раствором обезжиренного сухого молока) и инкубируют мембрану сначала с конъюгатами антител а затем с субстратом. Аналогично DAS- and TAS-ELISA, в дот-формате используют как конъюгаты специфичных к фитопатогену антител, так и меченные ферментом антивидовые антитела. Так же, как планшеты, мембраны между обработками промывают. В качестве субстратов, дающих нерастворимые окрашенные продукты реакции, используют 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат и тетразолий нитросиний. Положительный результат анализа выглядит как пятно на мембране в месте нанесения образца.
Существует и другой экспресс-вариант ELISA, когда полоску с мембраной, на которой иммобилизованы антитела, погружают в образец, а затем обнаруживают захваченный антиген мечеными ферментом антителами против антигена или против антиген-специфичных антител. Этот вариант называют «дип-стик» (dip-stick) анализом.
Еще один быстрый способ детекции патогенов растений, заимствованный фитопатологами из клинической диагностики, предполагает использование простых устройств с «латеральным потоком». В англоязычной литературе этот метод известен как LFA (Lateral Flow Assay). Обычно тест проводят с помощью полоски, на которой последовательно расположены зона нанесения образца, нитроцеллюлозная мембрана, с участком специфичных к определяемому антигену антител (зона детекции), и поглощающая зона из впитывающего материала. Зона контакта с образцом также содержит те же антитела, но химически связанные с коллоидным золотом, а во фронтальной части поглощающей зоны содержаться антивидовые антитела. Если в анализируемом жидком образце присутствуют антигены детектируемого патогена, они захватывается антителами контактирующей зоны и комплекс «антиген — антитело*Au» дрейфует вместе с потоком жидкости в зону детекции, где улавливается антителами. По мере поступления иммунного комплекса, антитела *Au концентрируется, и на этом участке появляется узкая окрашенная полоса. Вторая полоса образуется в результате связывания комплекса антивидовыми антителами. Таким образом, о положительном результате говорит наличие двух полос, а в случае отсутствия фитопатогена в образце появляется только одна (вторая) полоса, свидетельствующая, что тест работает.
Выпускаются коммерческие наборы и иммунореагенты для экспресс-ELISA, позволяющие обнаружить в растениях и почве некоторые бактерии (например, Clavibacter michiganensis subsp. michiganesis, Xanthomonashorotum pv. pelargoni, Ralstonia solanacerum), оомицеты (например, Phytophthora cinnamomi) и грибы (к примеру, Penicillium islandicum, и Humicola lanuginose).

  • Анализ состава жирных кислот при идентификации фитопатогенных бактерий
  • Количественная обработка результатов ПЦР
  • Разновидности метода ПЦР
  • Методы с использованием ПЦР
  • Методы гибридизации нуклеиновых кислот
  • Другие методы иммунодиагностики фитопатогенов
  • Некоторые примеры практического использования ELISA
  • Основные варианты ELISA, применяющиеся в фитопатологии
  • Иммуноферментный сорбционный анализ - ELISA
  • Методы диагностики, основанные на взаимодействии антител с антигенами фитоп ...

  • Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

    Министерство сельского хозяйства Оренбургской области

    Правительство Оренбургской области

    Визитка компании - сайт компании

    Ильинка Фаворит Агромир Техноорь

    Системы точного земледелия Автопартнер





    Акцент

     

    • Рейтинг@Mail.ru
    • Яндекс.Метрика
    • Индекс цитирования