Использование промежуточных векторов
Суть данного подхода заключается в том, что вначале клонируется Т-ДНК в E. coli с использованием плазмиды pBR322. Затем, фрагменты ДНК, содержащие целевой ген, встраивают в определенные места Т-ДНК, предварительно выделенной плазмиды и, полученные таким образом химерные плазмиды повторно клонируют в клетках кишечной палочки (рис. 14.2, 14.4).
Клонированные плазмиды вносят в клетки A. tumefaciens, имеющие плазмиду pTi дикого типа. В результате гомологичной рекомбинации происходит встраивание химерной Т-ДНК из промежуточного вектора в интактную pTi-плазмиду дикого типа. Полученные клоны агробактерии, несущие рекомбинантную pTi-плазмиду с целевым геном используют в опытах по трансформации растений.