ИФА IgM НА ЧУМУ СОБАК

22-08-2014, 20:50

ИФА IgM НА ЧУМУ СОБАК

ИФА IgM НА ЧУМУ СОБАК

1 – ВВЕДЕНИЕ

Чума собак – системная патология, возникающая у собак и прочих диких представителей семейства псовых. Ее возбудитель – вирус собачьей чумы (CDV), морбилливирус из семейства парамиксовирусов. Передается при прямом контакте, через вдыхание и путем трансплацентарного переноса. Выводится с выделениями и секретом в острый период. Вирус размещается в нервной системе, глазах, коже и легких. Симптоматология разнообразна: изменения кожи, пищеварительной, нервной, дыхательной систем и зрения. Смертность может составлять около 50% (среди молодых и не привитых животных).

 

Диагноз ставится на основании истории болезни, симптомов и лабораторных исследований. Одно из них – определение антител. 

 

2 – ПРИНЦИП ПРОВЕДЕНИЯ ТЕСТА

Данный комплект основан на ферментном иммуноанализе с захватом. Краткое описание принципа проведения теста:

Моноклональное антитело (Мат) фиксируем на твердой опоре, пластина из полистирола. При добавлении сыворотки собаки присутствующие в пробе ИгМ захватываются Маб, адсорбированным на пластине. После промывания с целью удаления всего материала, не связанного из пробы сыворотки, добавляют вирусный антиген (рекомбинантный нуклеокапсид). ИгМ захватывает антиген только в то случае, если проба сыворотки содержит иммуноглобулин М, специфичный к Cdv. После дополнительного промывания добавляется Маб, конъюгированный пероксидазой, специфичный к белку нуклеокапсида Cdv. После промывания и добавления субстрата произойдет колориметрическая реакция, которую можно измерить спектрофотометром.

Наличие цвета означает наличие антител М против вируса в сыворотке собаки, а отсутствие цвета говорит об отсутствии специфических антител. 

 

3 СОДЕРЖАНИЕ КОМПЛЕКТА

В комплект входит:

•       1 формный планшет для микротитрования (96 лунок), покрытых Маб, специфичным к ИгМ.

•       1 ампула с позитивной регуляцией, в готовом виде.

•       1 ампула с негативной регуляцией, в готовом виде.

•       1 ампула с конъюгатом пероксидазы 100Х.

·     1 бутылка рекомбинантного вирусного антитела, концентрированного х10.

•       1 бутылка промывочного раствора, концентрированного х10.

•       1 бутылка с готовым к использованию субстратом.

•       1 бутылка с готовым к использованию стоп-раствором.

•       1 бутылка с готовым к использованию разбавителем.

 

4-МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ДЛЯ ПОЛЬЗОВАТЕЛЯ

•       Внимательно изучить инструкцию по применению.

•       Перед использованием выдержать все реагенты при комнатной температуре (20°С - 25°С)

•       Не перепутать реагенты или инструкции из разных комплектов или наборов.

•       Избегать загрязнения реагентов комплекта.

•       Не использовать компоненты после истечения их срока годности.

·     Не перепутать компоненты из разных партий.

•       В помещении для работы с образцами либо комплектом запрещается есть, пить или курить.

•       Для каждой пробы использовать новую пипетку.

При каждом использовании комплекта систематически проводить тестирование позитивной регуляции и негативной регуляции.

Хранение реагентов: комплект необходимо хранить при +4°С.

 

5 - ПРОЦЕДУРА ПРОМЫВКИ

 

Этапы промывки необходимо осуществлять, используя автоматическую моющую машину либо многоканальное капельно-дозировочное устройство, позволяющее дозировать 300 µл промывочного раствора в каждую лунку. Помывку необходимо проводить следующим образом:

•       Опорожнить содержимое пластины, быстро перевернув пластину во избежание возможного смешения содержимого разных лунок

•       Дозировать 300 µл промывочного буфера в каждую лунку.

•       Аккуратно встряхнуть пластину, избегая попадания из одной лунки в другую.

•       Декантировать пластину и энергично постучать по лункам для удаления промывочного буфера.

•       Повторить процедуру столько раз, сколько указано в инструкции к комплекту.

•       Перед опорожнением содержимого пластины на последнем этапе промывки убедитесь, что следующий реагент, который нужно будет добавить на пластину, находится в готовом виде.

•       Не нужно просушивать лунки дольше необходимого времени перед дозированием реагента на следующем этапе.

•       После последнего этапа промывки промакнуть пустые перевернутые лунки чистыми бумажными полотенцами либо абсорбирующей бумагой для удаления остатка промывочного буфера.

 

6 - ПОДГОТОВКА ПРОБ

 

Пробы сыворотки для тестирования должны быть разбавлены в разбавителе в соотношении 1 / 100.

Для ТИТРОВАНИЯ рекомендуется проанализировать два разных варианта разбавления, начиная с разбавления 1/100 для каждой пробы сыворотки, и заканчивая желаемой конечной концентрацией (как правило, до 1,6400)   

 

7 - ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ

 

Промывочный буферный раствор:

Разбавить одну часть концентрированного промывочного буфера, поставляемого с комплектом, в 9 частях дистиллированной либо деионизованной воды.

После разбавления промывочный буферный раствор нужно хранить при +4°С.

 

Контрольная мультисыворотка (позитивная и негативная регуляции):

Регуляции готовы к использованию. Не разбавлять.

 

Приготовление конъюгата: готовить непосредственно перед применением.

Разбавить разбавителем 1/100. Необходимое и достаточное количество конъюгата для полной пластины составляет 110 μл конъюгата в 11 мл разбавителя. На полосу с 8 лунками – 10 μл конъюгата в 1 мл разбавителя. Каждый раз готовить только необходимое для анализа количество, оставшийся конъюгат подлежит утилизации. Перед использованием раствор хорошо встряхнуть.

 

8 - ПОРЯДОК ПРОВЕДЕНИЯ ТЕСТА

•       Перед началом проведения теста выдержать все реагенты и лунки, которые понадобятся, в условиях комнатной температуры (минимум 30 минут), за исключением конъюгата и рекомбинантного антитела.  

•       Добавить в лунки 100 µл позитивной и негативной регуляций в две разные лунки. Для испытания добавить 100 μл каждого раствора пробы сыворотки (подготовленного в соответствии с ранее упомянутыми указаниями) в оставшиеся полоски на планшете. Рекомендуется тестировать (пробу и контрольную мультисыворотку) в двойных лунках. Герметично закрыть пластину и выдерживать 15 минут при 37°С.

•       Промыть 4 раза ранее описанным способом.

•       Добавить 100 µл антигена, подготовленного в соответствии с ранее приведенными указаниями, в каждую лунку. Герметично закрыть пластину и выдерживать 15 минут при 37°С.

•       Промыть 4 раза ранее описанным способом.

•       Добавить 100 µл конъюгата, подготовленного в соответствии с ранее приведенными указаниями, в каждую лунку. Герметично закрыть пластину и выдерживать 15 минут при 37°С.

•       Повторить этапы промывания 4 раза в соответствии с ранее приведенными указаниями.

•       Добавить 100 µл раствора субстрата в каждую лунку. Выдержать пластину 5 минут при комнатной температуре.

•       Добавить 100 µл стоп-раствора в каждую лунку. Проверить спектральную поглощательную способность в каждой лунке спектрофотометром при 450 нм.


9 - СЧИТЫВАНИЕ И РАСШИФРОВКА РЕЗУЛЬТАТОВ

Считывание значений спектральной поглощательной способности необходимо проводить при длине волны 450 нм.

Комплект Валидизация

Тест считается действительным, если:

Результаты наблюдений за отрицательным контролем < 0,3

Результаты наблюдений за положительным контролем > 0,8

Расшифровка результатов

С помощью значения положительного контроля необходимо следующим образом рассчитать пороговые значения: 

Пороговое значение = результаты наблюдений за положительным контролем х 0,2

При работе с пробами в двойных лунках значение результатов наблюдений за пробой будет средним значением по обеим лункам.

Отрицательные пробы: пробы с результатами наблюдений ниже порогового значения.

Положительные пробы: пробы с результатами наблюдений выше порогового значения.

 

Низкие-средние титры (соответствующие значениям IFI 1/20-1/80). Такие пробы показывают значения наблюдений между: 0,2 х результаты наблюдений за положительным контролем и 0,7 х результаты наблюдений за положительным контролем

Высокие титры (соответствующие значениям IFI > или равно 1/160). Такие пробы показывают значения наблюдений более чем 0,7 х результаты наблюдений за положительным контролем.

Не смотря на хорошую чувствительность и специфичность данного теста, все положительные пробы необходимо подтверждать другими диагностическими методами. Доказательная диагностика не должна основываться на результатах только одного теста. Данные результаты нужно сопоставлять с прочими данными: история болезни животного, вакцинация и клинические симптомы.

 

 


  • Аллерго-пробы для кошек, собак,лошадей.
  • Экспресс-тесты, общие для кошек и собак(производитель Quicking Biotech Co., ...
  • ИФА тесты для кошек и собак
  • Концентрат хлоргексидина глюконат 20%
  • Ренал Эдвансед для собак

  • Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

    Министерство сельского хозяйства Оренбургской области

    Правительство Оренбургской области

    Визитка компании - сайт компании

    Ильинка Фаворит Агромир Техноорь

    Системы точного земледелия Автопартнер





    Акцент

     

    • Рейтинг@Mail.ru
    • Яндекс.Метрика
    • Индекс цитирования