Гены-маркеры для отбора трансформантов
Поскольку частота трансформации, как правило, невелика, то в гибридные плазмиды вводят гены-маркеры для удобства отбора трансформантов на селективных средах. В качестве селективных маркерных генов используются гены устойчивости к антибиотикам из E. coli (канамицину, хлорамфениколу и т. д.), к которым чувствительны растительные клетки. Помимо генов устойчивости в качестве маркерных генов используются также репортерные гены, позволяющие выявлять трансформированные клетки в интактных растительных тканях. Примером репортерных генов являются гены, кодирующие биосинтез фермента люциферазы, выделенного из некоторых бактерий и светлячков рода. В этом случае трансформанты выделяются на общем фоне способностью к свечению. Удобным репортерным маркером является также ген бактериальной p-D-глюкуронидазы (GUS-ген), который позволяет идентифицировать трансформанты по специфическому окрашиванию селективных сред.
Для экспрессии бактериальных генов-маркеров в клетки растений вводятся соответствующие сигнальные последовательности для начала и окончания процесса транскрипции этих генов. В качестве таких регуляторных элементов используются следующие:
• 35S-промотор вируса мозаики цветной капусты (ВМЦК);
• промоторы опиновых генов pTi-плазмиды;
• промотор гена малой субъединицы фермента рибулозодифосфаткарбоксилазы;
• промотор гена белка, связывающего хлорофилл и др.