Регенерация трансформантов

Наиболее узким местом в технологии трансгенеза является регенерация целых растений из трансформантов. Регенерация легче происходит из многоклеточных структур. Наиболее распространенным методом является метод листовых дисков. Кружочки листовой ткани, высеченные стандартным пробойником, инкубируют в суспензии клеток агробактерий, в плазмиде которой имеется вставка с целевым геном. Затем кусочки переносятся на селективную среду регенерации, содержащую антибиотики, блокирующие рост агробактерии (карбеинциллин), а также антибиотики, ингибирующие рост нетрансформированных тканей (канамицин, неомицин, хлорамфеникол, метатрекстат). Селективная среда позволяет отобрать только те ткани листа, которые содержат маркерные гены, т. е. трансформированные Т-ДНК ткани. Наличие целевого гена далее проверяется с помощью генетического и молекулярного анализа.